植物养护汇集了海量植物养护知识,植物的养护技巧,这些您知道吗?小编带你了解下植物养护的知识。感谢您的阅读,植物59小编向您推荐《影响芦荟组织培养的重要因素》,希望您喜欢!

芦荟的组织培养是推动芦荟产业化种植的重要方面之一,在芦荟组织培养中,使用的生长素类有吲哚丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA),细胞分裂素类使用较多的是6-苄氨基嘌呤(6-BA),(玉米素)ZT和(激动素)KT使用较少。不同品种的芦荟、不同部位外植体,对生长素的种类和浓度要求也不同。因此,生长调节物质的使用情况较为复杂,但大致遵循以下规律:

生长素类物质与细胞分裂素类物质搭配使用对芽的分化和增殖效果较好,而生根培养多数单独使用IBA或NAA。在促进侧芽产生时往往使用较高浓度的细胞分裂素,在一定浓度范围内,如使用高浓度6-BA可明显促进侧芽产生,随着6-BA浓度的升高,分化的芽也随之增加。但是,6-BA在培养过程中存在一定程度的累积效应,过高浓度的细胞分裂素会抑制新芽的发生和生长,且导致培养材料变异的概率增大。适宜浓度的IBA比NAA更有利于芽的分化和增殖,有实验表明,在相同的6-BA浓度下,IBA作用比NAA更有效,增殖率较高,苗生长粗壮,黄叶、畸形叶很少出现,若培养基中不加IBA或其浓度过低,则芽变纤细,不利移栽成活;但高浓度IBA明显抑制了芽的分化。而在生根培养基中,IBA的生根效果通常要优于NAA。

研究表明,活性炭对多数芦荟种类组培有促进生根作用,在加有活性炭的培养基中,活性炭可以吸收根基有害物质,促进生根作用。但活性炭的浓度不宜太高,过高则会吸附外源生长素,进而抑制生根作用。通常情况下,1mg活性炭大约能吸附100g生长调节物质,在不同的培养基中,活性炭的吸附能力也有所不同。此外,向培养基中添加一定浓度的腐殖酸、香蕉汁和苹果汁等,可使腋芽提早萌动,提高腋芽的出芽率和增殖系数,促进组培苗的根系发育和叶片生长。

在芦荟的组织培养中,培养条件不同也会产生很大的影响。在培养条件中,以pH最为重要。培养基的pH一方面对离体器官的形成和发育起着重要的作用,另一方面对芽的生长、分化以及培养基的硬度有很大的影响。在偏酸性条件下(pH6.2)比较有利于分化形成愈伤组织,并进一步形成不定芽;在中性至偏酸环境(pH6.27.0)下,比较有利于不定芽的分化增殖。培养条件中,另一个重要的因素是光照,包括光照强度和光照时间。光照对外植体的褐变有一定影响。芦荟的组织培养一般在黑暗或弱光照的条件下进行即可,光照过强,外植体容易发生褐变。M.zw59.cOM

另外,温度也是影响芦荟组织培养的一个重要因素,芦荟的组织培养通常在25℃条件下进行,温度过高或过低均易导致褐变的发生。通常在组织培养过程中加入抑制剂和吸附剂来减轻或避免褐变的产生。常用抑制剂有Vc、半胱氨酸、硝酸银等,其中硝酸银的抗褐变效果较好,当硝酸银浓度为15mg/L时,抗褐变效果最佳。此外,向培养基中加入活性炭,也可有效降低外植体的褐变。

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影响芦荟培养技术的几个因素


芦荟的组织培养是推动芦荟产业化种植的重要方面之一,在芦荟组织培养中,使用的生长素类有吲哚丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA),细胞分裂素类使用较多的是6-苄氨基嘌呤(6-BA),(玉米素)ZT和(激动素)KT使用较少。不同品种的芦荟、不同部位外植体,对生长素的种类和浓度要求也不同。因此,生长调节物质的使用情况较为复杂,但大致遵循以下规律:

生长素类物质与细胞分裂素类物质搭配使用对芽的分化和增殖效果较好,而生根培养多数单独使用IBA或NAA。在促进侧芽产生时往往使用较高浓度的细胞分裂素,在一定浓度范围内,如使用高浓度6-BA可明显促进侧芽产生,随着6-BA浓度的升高,分化的芽也随之增加。但是,6-BA在培养过程中存在一定程度的累积效应,过高浓度的细胞分裂素会抑制新芽的发生和生长,且导致培养材料变异的概率增大。适宜浓度的IBA比NAA更有利于芽的分化和增殖,有实验表明,在相同的6-BA浓度下,IBA作用比NAA更有效,增殖率较高,苗生长粗壮,黄叶、畸形叶很少出现,若培养基中不加IBA或其浓度过低,则芽变纤细,不利移栽成活;但高浓度IBA明显抑制了芽的分化。而在生根培养基中,IBA的生根效果通常要优于NAA。

研究表明,活性炭对多数芦荟种类组培有促进生根作用,在加有活性炭的培养基中,活性炭可以吸收根基有害物质,促进生根作用。但活性炭的浓度不宜太高,过高则会吸附外源生长素,进而抑制生根作用。通常情况下,1mg活性炭大约能吸附100g生长调节物质,在不同的培养基中,活性炭的吸附能力也有所不同。此外,向培养基中添加一定浓度的腐殖酸、香蕉汁和苹果汁等,可使腋芽提早萌动,提高腋芽的出芽率和增殖系数,促进组培苗的根系发育和叶片生长。

在芦荟的组织培养中,培养条件不同也会产生很大的影响。在培养条件中,以pH最为重要。培养基的pH一方面对离体器官的形成和发育起着重要的作用,另一方面对芽的生长、分化以及培养基的硬度有很大的影响。在偏酸性条件下(pH6.2)比较有利于分化形成愈伤组织,并进一步形成不定芽;在中性至偏酸环境(pH6.27.0)下,比较有利于不定芽的分化增殖。培养条件中,另一个重要的因素是光照,包括光照强度和光照时间。光照对外植体的褐变有一定影响。芦荟的组织培养一般在黑暗或弱光照的条件下进行即可,光照过强,外植体容易发生褐变。

另外,温度也是影响芦荟组织培养的一个重要因素,芦荟的组织培养通常在25℃条件下进行,温度过高或过低均易导致褐变的发生。通常在组织培养过程中加入抑制剂和吸附剂来减轻或避免褐变的产生。常用抑制剂有Vc、半胱氨酸、硝酸银等,其中硝酸银的抗褐变效果较好,当硝酸银浓度为15mg/L时,抗褐变效果最佳。此外,向培养基中加入活性炭,也可有效降低外植体的褐变。

红豆杉的组织培养


红豆杉是常绿乔木,小枝秋天变成黄绿色或淡红褐色叶条形,雌雄异株,种子扁圆形。种子用来榨油,也可入药。属浅根植物,其主根不明显、侧根发达,高30米,干径达1米。叶螺旋状互生,基部扭转为二列,条形略微弯曲,长1~2.5cm,宽2~2.5mm,叶缘微反曲,叶的端缘渐尖,叶背有2条宽黄绿色或灰绿色的气孔带,中脉上密生有细小凸点,叶缘绿带极窄,雌雄异株,雄球花常单生于叶腋,雌球花胚珠单生于花轴上部侧生短轴的顶端,基部有圆盘状的假种皮。种子扁卵圆形,有2棱,种卵圆形,假种皮杯状,红色。因为红豆杉的树皮有抗癌物质紫杉醇,所以有许多人进入林中来剥树皮,使得红豆杉的数量急剧下降。

红豆杉的组织培养技术

(一)、材料

较为适宜的组培外植体为新生的嫩枝,取材时间以每年的7、8月份为宜

(二)培养过程

1、愈伤组织诱导用培养基

培养基的基本成分采用B5或MS的微量元素、有机物和铁盐,外加KNO32500mg/L,NH4NO3825mg/LKH2PO4240mg/L,MgSO4?7H2O370mg/L,CaCl2?2H2O660mg/L。添加的激素种类及数量为NAA0.8-1.0mg/L、BA0.3-0.5mg/L,调PH值为5.8-6.0;琼脂粉和蔗糖用量分别为5.6-6.0g/L和30g/L。配置好的培养基用培养瓶分装,经高温、高压灭菌后备用。

2、材料消毒与接种

取新生的嫩枝(带有针叶)放入加有0.02%洗洁精的自来水中浸泡10分钟,浸泡过程中需经常搅动,浸泡结束后用自来水冲洗10分钟以上。将嫩枝转入一干净的三角瓶中。

以下所有操作必须在超净工作台上进行无菌操作。首先往三角瓶中加入75%的酒精,加入量应为嫩枝体积的10倍以上,浸泡杀菌30-60秒,倒掉酒精,用无菌蒸馏水年漂洗一次;再将嫩枝转入事先已高压消毒的三角瓶中,加入15倍与嫩枝体积的0.1%的升汞溶液,浸泡杀菌5-8分钟,浸泡过程中要不断摇动,以使升汞与嫩枝充分接触。为了达到彻底杀菌的效果,有人建议在升汞溶液中加入0.02%的表面活性剂,这样可能更好一些,但要相对缩短杀菌时间。倒掉升汞溶液,用无菌蒸馏水冲洗4-6次,每次1-2分钟,以彻底除去升汞。将嫩枝从三角瓶中分批取出,用无菌滤纸吸去材料表面的水分,将嫩枝切成0.5-0.8CM的小段,并切取部分针叶,嫩枝切段和针叶同时用作外植体,接种在诱导愈伤组织的培养基上。接种时要让针叶的腹面接触培养基,嫩枝的植物学近地端接触培养基。注意用过的升汞溶液和冲洗液不要到处乱倒,以防重金属污染。将接种好的培养物放置于培养室中培养,温度(252)℃,光照强度1500-2000lx,光照时间10h/d。

3、愈伤组织诱导

红豆杉嫩枝和针叶在培养基上2-3周后即开始形成愈伤组织,约4-5周愈伤组织直径可达1-2CM。不同种的红豆杉和不同的外植体之间形成愈伤组织的比率、时间早晚和生长速度存在明显差异,南方红豆杉和东北红豆杉的嫩枝切段出愈较快,出愈率分别为89%和70%,针叶出愈较慢,出愈率也较低,分别为36%和15%;普通红豆杉出愈较慢但出愈率较高,嫩枝和针叶的出愈率分别为94%和30%。愈伤组织开始时为灰白色,随着愈伤组织的增大,先期形成的愈伤组织颜色由灰白色变为棕色,这可能预示着愈伤组织在逐渐发生褐变,因此要及时给予注意,尽量保持较低的培养温度和经常更换培养基。当愈伤组织生长到一定大小时即可转入液体进行悬浮培养。

4、细胞悬浮培养与继代

利用愈伤组织而不是用小苗或大树来生产提取紫杉醇,是一条正在探索的途径,如果成功则可以实现工厂化生产,从根本上解决红豆杉资源不足的矛盾。因此,通过嫩枝和针叶培养产生的愈伤组织不需要进行芽分化的诱导,而是将愈伤组织直接转入细胞悬浮培养。具体做法是将从嫩枝和针叶上产生的愈伤组织取下来直接转入液体培养基中进行振荡培养,所用培养基与上述诱导培养基相同。在初次将愈伤转到液体培养基即可适当加入少量纤维素酶和果胶酶,以加快愈伤组织分离成单个细胞或小细胞团。

在初次悬浮培养阶段可用50ml的小三角瓶,每瓶加10ml液体培养基,放入愈伤组织,在20-23℃的摇床上振荡培养,光照条件与普通培养相同。每周需要更换一次培养基,更换时用5-10ml的平头移液管将三角瓶中的愈伤组织、单个细胞或细胞团过滤出来,直接转到新鲜的培养基中即可。在悬浮培养过程中应随时注意每一瓶中愈伤组织、细胞团生长的情况,挑选生长速度最快和特征最好的作为继代的材料,毫不可惜的丢掉那些不好的(生长缓慢、颜色不正等)材料,这样经过几代的选择,就可以挑出符合理想的材料,作为悬浮系进行扩增培养。

用植物组织培养这种先进的培养方法,能够迅速、大量的生产出目前人类急需的红豆杉,能够为癌症的治疗提供很大的方便,社会以及积极效益都非常的明显。

新几内亚凤仙的组织培养


凤仙是凤仙花科凤仙花属多年生常绿草本植物。新几内亚凤仙是凤仙花家族中的一个新品种。它花色丰富,四季开花,花期长,叶色独具特色,作为周年供应的时尚盆花,日益受到了人们的青睐。它的传统繁殖方法是通过播种繁殖,但播种繁殖需要恒定的温度,而且种子价格比较昂贵,发芽率低。近年来,用无性繁殖,利用组织培养技术,既可以在短期内取得大量的优质脱毒苗,又可避免因常规无性繁殖而导致的种性退化。具体可用新几内亚凤仙的茎段作为外植体,对其进行离体快速繁殖。

材料与方法

试材处理

从新几内亚凤仙植株上剪取带有腋芽的嫩梢,去掉叶,先用自来水冲洗10分钟,再用洗洁剂溶液洗涤1-2次。在无菌条件下,依次用70%的酒精浸泡30秒钟,2%的次氯酸钠浸泡12分钟,无菌水冲洗3-5次。最后将处理好的嫩梢切成每个节间约0.5cm长的带芽茎段接种在预制好的初代培养基上。

培养条件

分化培养基的选择

以MS作为基本培养基,分别设置BA0.5、1.0、1.5、2.0mg/L,NAA0.2、0.4、0.6、0.8mg/L各4种浓度,共16个组合。筛选分化培养基中BA和NAA最佳组合,3次重复。各培养基组合均加入蔗糖3%-4%,琼脂6-8g,Ad30mg/L,调PH值为5.8。

生根培养基的选择以MS为基本培养基,设置IBA0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mg/L5种浓度,摸索最佳生根条件。各培养基均加入蔗糖2%-2.5%,琼脂6-8g,调PH值为5.8。

继代培养

新接的外植体约30天萌发成苗,苗高2-3cm时,将小苗剪成0.5cm长带芽茎段,放入分化培养基中继代培养。生根培养

小苗高3cm左右时,从基部剪下,接种于生根培养基上,进行生根培养。

小苗移栽

小苗生根培养根长达2cm时,进行移栽,先移入温室中炼苗1-2天,温室中培养2-3周后上盆。

结果与分析

不同浓度的BA和NAA组合对新几内亚凤仙分化出苗的影响以MS作基本培养基,4种浓度BA和4种浓度NAA组合,对新几内亚凤仙出苗影响。

结果表明:芽的增殖和嫩梢的增长不仅取决于BA、NAA的绝对数量,而且取决于二者相对比例。浓度最大BA/NAA条件下,繁殖系数17达最大,而且嫩梢生长度也达到最大1.23,浓度最小BA/NAA条件下,繁殖系数、嫩梢长度之比为10/0.67,二者绝对值处于中间状态。综合芽的形成和嫩梢生长两种情况看:高浓度的BA(1.5-2.0mg/L)与NAA配合时,嫩梢生长较正常,平均株高1.09cm,增殖倍数为14,较低浓度的BA(0.5-1.0mg/L)与NAA配合时,繁殖系数为8.9,平均株高为0.68cm,长势不良,实验条件下以BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L效果为最佳。不同浓度的IBA对生根的影响

以MS为基本培养基,5种浓度IBA条件下生根效果见表2。结果表明:开始生根天数随IBA浓度加大而缩短,IBA浓度从0.3-0.9mg/L范围内,随浓度加大,生根率、每株根数增加,超过0.9mg/L,生根率下降。且多形成粗大根,产生愈伤组织或从愈伤组织上再生根。实验条件下,以0.9mg/L生根效果最好,生根较快,根系生长正常,根数较多。

小苗移栽

已生根小苗经20天,待根长达2cm时,取出试管苗,洗去根上琼脂,移至透水通气的蛭石中,先在培养室中温度20℃-25℃,相对湿度65%-75%条件下培养2-3周,然后移至散射自然光下炼苗1-2周,最后上盆进入温室,成活率可达95%以上。这期间除了注意保温保湿外,土壤湿度不宜太大,温度以23℃-25℃为好,注意采用杀菌剂保护,避免幼苗腐烂死亡。

结论

MS+BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+Ad30g/L+蔗糖3%+琼脂8g/L,调PH值为5.8是新几内亚凤仙茎段培养较为理想培养基。继代培养天数约为30天左右,繁殖系数可达17,嫩梢生长正常。

在MS+IBA0.9mg/L+蔗糖2.2%+琼脂7g/L,调PH值为5.8的培养基上,新几内亚凤仙试管苗生根效果较好,生根率可达95.4%,根系发达,植株生长旺盛。

生根两周后的试管苗尚需炼苗2-3天,经培养室移植培养2-3周,自然光下1-2周炼苗可上盆入温室,成活率达95%以上,小苗成活关键是基质选择及温、湿度控制。

玫瑰的组织培养技术


玫瑰属蔷薇科蔷薇属植物,不但具有一定的园林观赏价值,而且有较高的经济价值和药用价值。玫瑰常规以分株、压条、扦插等方法繁殖,繁殖率较低。现甘肃省庆阳县有一玫瑰生产基地开展研究建立玫瑰的快速繁殖体系,并为玫瑰的工厂化生产和规模化种植提供科学依据。

1、材料:以甘肃省陇东学院校园内栽培的玫瑰为材料。

2、研究方法:以MS或1/2MS为基本培养基,附加不同浓度的6-BA、IAA、IBA、NAA等,蔗糖3%(为了降低成本,蔗糖均用市售白砂糖代替),琼脂0.35%,pH5.8,培养温度为25℃,光照时间每天12小时,光照强度约1500lx。将启动培养基上腋芽长出的无根苗剪成单芽茎段,转人不定芽诱导培养基上,诱导不定芽产生;不定芽继代周期为5周,增殖培养时将不定芽块切割成小芽块转至增殖培养基中,每100毫升培养瓶中接种3个芽块;生根前将较弱的无效苗转人壮苗培养基中促使苗健壮;生根培养时将高约3厘米左右的芽剪下插入生根培养基,生根苗移栽采用二步法。

1、无性系的建立。2005年6月从该院校园栽培的植株上取生长健壮的半木质化枝条,依常规方法灭菌处理后,剪成茎尖和带腋芽茎段,接种于无性系建立培养基上。⒛天后统计实验结果显示,就无性系建立而言,基本培养基MS比1/2MS效果好,在基本培养基中附加每升0.5毫克的6-BA和每升0.05毫克NAA,有利于愈伤组织的诱导和芽的萌生,愈伤组织诱导率可达16.5%,萌芽率为52.9%,且芽生长健壮。

2、不定芽的诱导。将无性系幼茎切成单芽茎段,分别接种在不定芽诱导培养基上,结果表明,以MS为基本培养基,附加每升1~3毫克的6-BA和每升0.1~0.5毫克的NAA,均可高频诱导产生不定芽,当6BA以较高浓度(每升2~3毫克)与NAA配合使用时,芽诱导率均为100%,产生的不定芽数量多,但茎不伸长,均为叶片,长势弱;较低浓度6-BA(每升1毫克)与每升0.1毫克NAA配合使用,虽然不定芽诱导率下降,但芽长势良好。说明MS附加较低浓度的6-BA与NAA利于玫瑰不定芽诱导与生长。同时发现,诱导产生的包埋于培养基中的不定芽长势最好,可能与其充分吸收营养有关。

3、芽的继代增殖培养及有效苗的产生。将产生的不定芽块切割成小芽丛进行继代增殖培养,增殖培养基为MS+6BA每升0.3毫克+NAA每升0.05毫克,继代周期为5周。在此培养基上,玫瑰仍以不定芽方式增殖,且大部分不定芽明显增高,叶片展开,长势较好。每l00毫升培养瓶接种3个芽块(约35个芽),经过一个继代周期培养,芽总数达132个,增殖系数为3.77。其中,高度在3厘米左右,能用于生根的有效苗的比率为43%,将较矮、长势弱的无效苗剪下,转到1/2MS壮苗培养基上,培养20天左右,芽苗明显长高、健壮,叶片舒展,叶色浓绿,可用于生根。

4、激素浓度对生根的影响。将增殖培养基上高度在3厘米左右的芽剪下,与壮苗后的芽一起插人生根培养基中诱导生根。结果显示,玫瑰为难生根植物,不同培养基和激素浓度对玫瑰生根的影响差异较大。培养基中无机离子强度对玫瑰生根有明显影响,无机离子减半(l/2MS)有利于生根。单独附加每升0.2~0.5毫克的IAA、IBA或NAA对根的产生及根的生长均有促进作用。每升0.2~0.5毫克的IAA与每升0.2~0.5毫克IBA配合使用,生根率明显提高,平均为38.6%,且切口端愈伤化程度低,产生的根短而粗壮,利于移栽;IAA、IBA、NAA二者配合使用,生根效果最佳,生根率最高达16.3%,产生的根粗壮、数量多,便于移栽成活。筛选出最佳生根培养基为1/2MS+每升IAA0.5毫克+每升IBA0.5毫克+每升NAA0.2毫克。

5、炼苗与移栽。将生根的组培苗在室内打开瓶盖炼苗2~3天后,在自来水中洗净根部培养基,移人珍珠岩苗床,外搭塑料拱棚及遮阳网,控制光照度在5000~10000lx以内,温度在15℃~35℃,湿度在85%以上,每周喷1次10%的MS大量元素营养液,2周后逐渐打开小拱棚,增加光照,4周后,便可进行常规管理。此法移栽,成活率可达94.3%。

试验结果表明,适合玫瑰不定芽诱导的培养基为MS+6-BA每升1.0毫克+NAA每升0J毫克;适合芽增殖的培养基为MS+6-BA每升0.3毫克+NAA每升0.05毫克,在此培养基上芽的增殖系数为3.77,可直接用于生根的有效苗的比率为43%;适合芽生根的培养基为1/2MS+IAA每升0.5毫克十IBA每升0.5毫克十NAA每升0.2毫克,在此培养基上芽的生根率为76.3%。生根苗炼苗后以珍珠岩作基质,移栽成活率为94.3%。据计算,当增殖系数为3.Ll、生根率为76.3%、移栽成活率为94.3%时,1个芽经1年10代培养,可产生约58万个芽,考虑到生产设施及人力等因素的限制,如此多的芽不可能一次全部生根,导致无法处理,甚至倒苗。因此,在实际生产中,如果从第7代开始将高度在3厘米左右43%芽进行生根与移栽,则1年可由1个芽生产3349株商品苗;同样,如果从第8代开始,1年l个芽可生产12,000余株商品苗。这样,对降低成本、提高效益是十分必要的。

蝴蝶兰的组织培养技术


蝴蝶兰为兰科多年生附生草本,又名蝶兰,是兰科植物中栽培最为广泛的种类之一,主要分布在热带及亚热带地区。其花形奇特,色彩艳丽,花期持久,素有兰中皇后的美誉,具有极高的观赏和经济价值,在国内外花卉市场上极受欢迎。蝴蝶兰是单茎气生兰,植株上极少发育侧枝,比其他种类的兰花更难于进行常规无性繁殖。组织培养是建立蝴蝶兰快速繁殖无性系的重要手段。

1外植体的选择

蝴蝶兰的茎尖、茎段、叶片、花梗侧芽、花梗节间、根尖等部位都已有培养成功的报道,方法各异,难度各有高低。蝴蝶兰不同外植体的成活率有差异,其中花梗侧芽的成活率最高,达75%;其次为花梗,成活率为62.5%;叶片和根尖最差,分别为12.5%和7.5%。针对不同外植体,取材方法也不同,通常取花梗节之间1~2cm长的幼嫩部分,切取长2~3mm的切段作为外植体。

2基本培养基的选择

蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括MS、1/2MS、VW、B5、KC、花宝及其改良型等,其中1/2MS对蝴蝶兰原球茎增殖效果最好。

3外源激素的选择

目前常使用的外源激素主要是生长素类(如IAA、2,4-D和NAA)和细胞分裂素类(如BA、ZT、KT)。蝴蝶兰组织培养中常用的细胞分裂素为6-BA,较高浓度(1~8mg/L)的6-BA能促进蝴蝶兰原球茎增殖,较低浓度(0.1~0.5mg/L)的6-BA则能促进原球茎分化。适宜浓度的6-BA配合较低浓度的NAA,更有利于原球茎的增殖,2.0mg/L6-BA和0.3mg/LNAA配合使用是蝴蝶兰原球茎增殖的最佳组合。

4培养基添加物对蝴蝶兰增殖和分化的影响

蝴蝶兰组织培养中常加入一些天然物质如椰乳、香蕉泥、番茄汁、苹果汁等,这些物质能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等,如加入100~200mg/L香蕉泥,具有较大的pH缓冲作用,有利于兰科植物的壮苗和生根。许多资料也表明,添加适量的香蕉泥、椰乳或含胶质的果菜汁等均对原球茎增殖有明显促进效果。

适量的添加物对蝴蝶兰丛生芽的诱导和生根也有一定的促进作用。培养基中添加活性炭,低浓度(0.5~1.0g/L)时对原球茎增殖影响不明显,但可促进蝴蝶兰生根;高浓度(2.0~3.0g/L)时对原球茎增殖有促进作用,但原球茎有黄化现象。

蔗糖作为培养基的能源物质和渗透调节剂,对原球茎的增殖生长影响较大。蔗糖含量为2%时,原球茎分化速度最快;蔗糖含量为2%~3%时,促进芽的形成;蔗糖含量为5%时,有利于根的分化和生长。蔗糖含量为3%~5%时,抑制原球茎的分化和生长,分化质量和分化速度都显著下降。

5原球茎继代中褐化的防治

蝴蝶兰和其它兰科植物一样,原球茎状体在继代培养过程中易褐变死亡,不易增殖。在培养基中添加1~2g/L活性炭,适时切除培养物的褐化部分并及时更换新鲜培养基,能有效抑制外植体褐变死亡;培养基中加入10%椰子水,也能促进原球茎的生长,减少原球茎增殖过程中的褐变。蝴蝶兰的群体效应很明显,单芽容易褐化死亡,且增殖较慢,因此,刚诱导出的原球茎状体不能过早切割转移,在继代阶段接种时,应尽量避免切成单芽,增殖时切块也不宜过小,否则容易褐化死亡。6~8月份高温季节采芽排出的褐变物质多,成活率也最低,所以要避免在夏季采芽。

6外界条件对蝴蝶兰的影响

培养基的pH值直接影响到培养物对离子的吸收,过酸或过碱都对植物材料生长有很大影响,此外,琼脂培养基的pH还影响到凝固情况。原球茎在pH值5.0~5.4的环境中生长最好,丛生芽的诱导与增殖在pH值5.6~5.8的环境中较好。

蝴蝶兰在组织培养中,通常都以日光灯为光源,因此,可以人为地进行控制其光照强弱。光照强度对试管苗发根和生长势均有明显的影响。光照为3000lx对蝴蝶兰根诱导和植株生长有利。

在诱导蝴蝶兰丛生芽过程中,由于所取的花梗芽为花芽,在培养过程中,较低的温度影响(15~22℃)会使大部分花梗芽发育成花芽;在较高温度(23~26℃)下培养,花梗花芽转化为营养芽,所以在进行蝴蝶兰丛生芽诱导时的适宜温度条件为(252)℃。

7生根壮苗及移栽

生根壮苗阶段关键在于严格筛选激素的种类和浓度,一般需降低培养基的激素含量,以便形成健壮苗。常用的生长素有IBA(0.3~1.5mg/L)、NAA(0.1~0.8mg/L)。添加GA30.1mg/L+NAA0.1mg/L的组合能明显提高生根率,且植株健壮,长势好。

蝴蝶兰属热带气生兰,具气生根,栽培上要求根部通气良好。现在蝴蝶兰移栽常用基质有水苔、椰糠、蛇木、树皮等,以水苔效果较好。

综上所述,用组培方法快繁蝴蝶兰较传统繁殖方法有3个明显的优点:①节省育苗用地;②节省繁殖材料,提高繁殖系数;③利用茎尖脱毒培养,挽救因受病毒侵染而退化的优良品种,提高质量和欣赏价值。总之,组培快繁技术可大大提高生产效益和经济效益。

紫叶稠李组织培养技术


紫叶稠李是优良的园林绿化树种。辽宁林业职业技术学院林盛教学基地于2003年4月从北京植物园引人紫叶稠李,经过引种观察,树体健壮,生长速度较快,3a生树高达2.5m,地径2.8cm;抗寒性强,2003年1月和2005年1月园地气温达到-27.1℃和-29.0℃,无冻害发生;枝条密度是大,叶片卵状长椭圆形,长度达12cm,尤其突出的是叶片在生长季表现为深紫色,用做行道树、庭荫树和园景点缀,具有较高的观赏价值。张宝刚等对紫叶稠李进行了芽接、枝接、扦插等方面的研究,取得了一定的成果为了在短期内获得大量的紫叶稠李苗木。满足绿化需求,笔者进行了紫叶稠李的组织培养研究,为进行工厂化育苗提供基本技术数据。更多绿色尽在植物59网

1、材料与方法

1.1材料来源

试验材料为辽宁林业职业技术学院林盛教学基地从北京植物园引入的生长良好、无病虫害的紫叶稠李。

1.2外植体选用

取生长健壮、无病虫害的紫叶稠李冬眠枝或刚刚萌动的枝条,切成带有一个顶芽或侧芽的茎段。

1.3外植体的灭菌处理

灭菌流程:小茎段一流水冲洗(30Min)洗涤荆溶液浸泡(10Min)流水冲洗(30min)(以下工作在超净工作台完成)75%酒精浸泡30s无菌水冲洗2次(1min1次)0.1%HgCl2浸泡(8min)无菌水冲洗6次(2min1次)。

1.4试验方法

1.4.1不同激素配比对紫叶稠李初代培养的影响。基本培养基为MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L(pH5.8),其中加入不同质量浓度的6-BA(设O.20、O.40、0.60、O.80、1.00mg/L质量浓度梯度)和NAA(设0.00、0.05、O.10mg/L一3个质量浓度梯度)作为初代培养的脱分化培养基,然后将消毒处理后的茎段接种在其中进行培养观察。

1.4.2不同激素配比对紫叶稠李再生嫩茎增殖的影响。

将初代培养获得的小植株除去叶片后再切成小茎段,接种到附加不同质量浓度的6一BA(0.50、1.00、2.00mg/L)、NAA(0.05、O.10、0.20Mg/L)和GA3(0.00、0.50、1.00mg/L)的继代分化培养基上(基本培养基同初代培养基),4周后观察增殖状况,并统计结果。

1.4.3不同生长素组合对紫叶稠李生根的影响。

以l/2MS+蔗糖20g/L+琼脂7g/L(pH5.8)为基本培养基,其中加入不同质量浓度的NAA(0.00、0.10、0.50、1.00mg/L)和IBA(O.00、0.10、O.50mg/L)作为生根培养基;将继代培养得到的株高在1.5~2.0cm的嫩茎转人生根培养基中。20d后观察生根状况,并统计结果。

以上培养基均在12l℃条件下灭菌20min。培养温度为202℃,光照12h/d,光强为20003000lx。

1.4.4生根苗移栽。当生根培养的小苗根长为1.52.5cm时。开瓶在温室炼苗7d,移栽前3d用50%可湿性多菌灵800倍液喷浇灭菌。试管苗移栽基质为珍珠岩+泥炭土和蛭石+草炭土两种,每种基质中2种材料的体积比均为l:l。每种基质移植小苗l000株。

2、结果与分析

2.1激素配比对紫叶稠李初代培养的影响

试验发现。紫叶稠李顶芽和侧芽的分化能力均较强,培养2周后逐渐分化出小植株。30d后部分小植株的叶腋处又分化出新的小植株。

由表l可知,不同激素配比对外植体的分化有显著影响,在MS+6一BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L培养基中,小植株分化数量最少;而在MS+6一BAO.60mg/L+NAA0.1mg/L培养基中。小植株分化数量最多,质量最好,分化率达到100.00%。可见,适宜的激素配比是诱导外植体分化的关键因素。

2.2激素配比对紫叶稠李再生嫩茎增殖的影响

由表2可知,增殖培养结果因激素配比不同而异,嫩茎增殖倍数随细胞分裂素质量浓度的增加而降低,以MS+6一BA0.50mgL。1+NAA0.05mg/L+GA30.50mg/L增殖倍数最高,达到8.17倍,且苗芽生长健壮。

2.3不同生长素组合对紫叶稠李生根的影响

由表3可知,以l/2MS+IBA0.50mg/L培养基的生根效果最好,每个试管苗生根35条,长度约1.52.5cm。生根率达到100%。

2.4基质对紫叶稠李生根苗移栽的影响

在生根植株培养阶段,对生长健壮的生根苗进行炼苗移栽。移栽后浇一次定根水。以后保持基质湿润,温度保持在20℃左右,初期适当遮荫。移栽后约15d的缓苗期过后,植株发出新根开始正常生长。

试验所使用的2种混合基质对移栽成活率的影响不显著,但对小苗后期生长速率有影响。移栽30d后统计珍珠岩+泥炭土和蛭石+草炭土的平均苗高分别为9.5cm和12.3cm。由此可见.蛭石+草炭土做移栽基质更适合试管苗的生长。

3、结论

在紫叶稠李组织培养过程中。6一BA与NAA的配比对外植体的诱导具有显著影响。在初代培养阶段,MS+6-BAO.60mg/L+NAA0.05mg/L培养基对外植体的脱分化效果最好,分化率达到100.00%。在继代增殖培养阶段。MS+6一BA0.50mg/L+NAA0.05mg/L+GA30.50mg/L培养基的增殖倍数最高,达到8.17倍,且苗芽生长健壮。在生根培养时,l/2Ms+IBA0.50mg/L培养基的生根效果最好,生根率达到100%,且苗形美观,色泽深绿,移栽后生长旺盛。在移栽阶段,在蛭石+草炭土(体积比为1:1)基质中,移栽30d后平均苗高为12.3cm,有利于试管苗移栽的成活与后期生长。

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